原代垂体瘤干细胞

1. 将组织块放入无菌无血清DMEM/NS里，用NS/PBS清洗*2～3次；
2. 用组织剪剪去多余的结缔组织或坏死组织，尽量剪碎，移至干净离心管；
3. 加入根据组织块大小相应的accutase（预先37℃加热），放入培箱15～20min；
4. 拿出后加入5倍A酶的DMEM终止消化，吹打；
5. 用滤网过滤，取10ul计数；
6. 将悬浊液加入至含有DMEM/F12+15%马血清+5～10%胎牛血清的培养皿内。

33mlf12+6ml马+2ml胎牛

传代

1. 将培养皿中液体吸入进离心管，1000rpm 3min离心；
2. 上清液倒入新的离心管；
3. 加入1ml的accutase后放入水浴锅消化4～5min；
4. 加入5ml培基终消；倒扣滤网（40um），加入液体时，细胞球在背面，后再正扣冲下细胞球以此过滤血细胞；？？？？？？？？？血细胞d=7-8um
5. 1000rpm 3min离心；
6. 重悬后加入培养皿。

形态

贴壁：垂体瘤细胞聚集成团向外增殖、分化。成纤维细胞。

悬浮：垂体瘤干细胞团，椭圆形/圆形团。血细胞。